Estudios del laboratorio de diversos parámetros orientados a tratar de dilucidar la fisiopatología del síndrome de ovarios poliquísticos (SOP). Parte 2 / Laboratory studies of several parameters aimed to elucidate the pathophysiology of polycystic ovary syndrome. Second part

RESUMEN Diversos estudios bioquímicos adicionales a la evaluación de Testosterona total (TT), biodisponible (Tbio) y libre (TL) han sido realizados a los efectos que pudieran resultar de mayor utilidad para el diagnóstico de patologías concomitantes en el SOP, entre otros. En la hormona anti Mülleriana, cuando la concentración supera a los 3,0 ng/ml existen evidencias de que el 79% de las mismas pueden ser identificadas correctamente como SOP. El Antígeno Prostático Específico (PSA), marcador de singular importancia en pacientes con cáncer de Próstata, con técnicas ultrasensibles ha podido ser detectado en más del 50% en mujeres. En un grupo de pacientes con SOP, los niveles circulantes de PSA fueron significativamente mayores que en las mujeres sin SOP. El Kiss-1 aislado de la placenta y demostrado en otros tejidos, presenta niveles aumentados que correlacionan con la LH, TT, TL y resistencia a la insulina (RI) en adolescentes con SOP versus adolescentes sin SOP, sugiriendo que el Kiss-1 podría estar involucrado en el desarrollo del SOP en estas pacientes. Algunas pacientes con SOP están asociadas a patologías relevantes, de las cuales han sido comunicadas el aumento del BMI, mayor grado de dislipemia, adiposidad central, RI y Síndrome Metabólico (SMe). En las pacientes con un fenotipo clásico (hiperandrogenismo, alteración del ciclo menstrual y ovarios poliquísticos), estas patologías son de mayor frecuencia y severidad que en los otros fenotipos, particularmente aquellos sin hiperandrogenismo. Otras determinaciones como TNFα, interleuquinas, test de tolerancia a la glucosa, ApoB, partículas pequeñas de LDL e Inhibidor del Activador del Plasminógeno-1 han sido comunicados que podrían ser de utilidad para tener mayor sensibilidad en la definición de patología concomitantes en el SOP. Actualmente se ha comenzado a evaluar otros marcadores como el Fetuin-A; Quemerina, Nesfatina-1, Neopterina y Endocannabinoides, cuyos resultados preliminares parecerían ser un aporte importante para evaluar SMe y RI en paciente con SOP y tratar de definir su prevalencia en los distintos fenotipos de esta patología.

ABSTRACT Several biochemical studies in addition to the evaluation of total Testosterone (TT), bioavailable (bioT) and free (FT) have been performed to the effects that could be of greater use for the diagnosis of concomitant pathologies in the PCOS, among others. The anti-Müllerian hormone whose concentration when exceeds 3.0 ng/ml, there is evidence that 79% of these patients can be correctly identified as PCOS. The Prostate-Specific Antigen (PSA), a marker of singular importance in patients with prostate cancer, with ultra-sensitive techniques, has been detected in more than 50% of women. In a group of patients with PCOS, circulating levels of PSA are significantly higher than in women without PCOS. The Kiss-1 isolated from the placenta and demonstrated in other tissues, has increased levels that correlate with LH, TT, TL and insulin resistance (IR) in adolescents with PCOS respect to adolescents without PCOS, suggesting that Kiss-1 could be involved in the development of the PCOS in these patients. In some patients with PCOS, they are associated with relevant pathologies, of which the increase in BMI, higher degree of dyslipidemia, central adiposity, IR and Metabolic Syndrome (MeS) have been reported. Those that show a classic phenotype (hyperandrogenism, alteration of the menstrual cycle and polycystic ovaries) these characteristics are of greater frequency and severity than in the other phenotypes, particularly those without hyperandrogenism. Other determinations such as TNFα, interleukins, glucose tolerance test, ApoB, small particles of LDL and Plasminogen Activator Inhibitor-1 have been reported that could be useful to have greater sensitivity in the definition of concomitant pathology in the PCOS. Currently, other markers such as Fetuin-A, Chemerin, Nesfatin-1 Neopterin and Endocannabinoids have been evaluated. The preliminary results suggest to be an important contribution to define MeS and IR in patient with PCOS and to try to determine its prevalence in the different phenotypes of this pathology.

Estudios de laboratorio de diversos parámetros orientados a tratar de dilucidar la fisiopatología del síndrome de ovarios poliquísticos. Parte 1 / Laboratory studies of various parameters aimed at trying to elucidate the pathophysiology of polycystic ovary syndrome. Part 1

Esta revisión fue realizada con el fin de evaluar nuestros resultados de laboratorio así como aquellos de la literatura que constituyen, a nuestro entender, aportes significativos en el síndrome de ovarios poliquísticos (SOP). Nuestro especial énfasis será presentar las limitaciones de las metodologías empleadas por nuestro grupo, comparativamente a las reportadas por otros investigadores. La determinación de andrógenos, en particular de Testosterona (TT), es quizá la de mayor complejidad dado que los resultados con los diferentes inmunoensayos empleados en nuestro medio producen resultados muy variables por los diferentes métodos y aún entre laboratorios que usan la misma metodología. La técnica de referencia es la cromatografía líquida en tándem con espectrometría de masa (LC-MSMS), de difícil aplicación en laboratorios de análisis clínicos debido a su alto costo y la imposibilidad de resolver numerosas muestras. En estudios previos demostramos que de los métodos habitualmente usados para evaluar la TT circulante, solo en 2 inmunoensayos los resultados obtenidos fueron satisfactoriamente validados indirectamente según el criterio del Consenso de los Centros para el Control y Prevención de Enfermedades (CDC, USA) contra LC-MSMS, los cuales fueron comparables a dicha metodología con niveles superiores a 0,5 ng/ml. El SOP puede presentar factores de riesgo aumentados para la enfermedad cardiovascular y la diabetes II. Estos factores no están debidamente categorizados en función de los distintos fenotipos del SOP. Se evaluarán los principales analitos empleados con este objetivo y los nuevos que aporten elementos de mayor especificidad en este sentido

This review was performed in order to evaluate our laboratory results as well as those of the literature that constitute, in our opinion, significant contributions in these pathophysiologies. Our special emphasis will be on presenting the limitations of the methodologies used by our group, compared to those reported by other researchers. The determination of androgens, in particular Testosterone (TT), is perhaps the most complex since the results with the different immunoassays used in our environment produce very variable results by the different methods and even between laboratories that use the same methodology. The reference technique is LC-MSMS, difficult to apply in clinical analysis laboratories because of its high cost and the inability to solve numerous samples. In previous studies, we demonstrated that, in comparison to LC-MSMS with the usual methods for evaluating circulating TT, the results obtained in only 2 immunoassays were satisfactorily validated indirectly according to the criteria of CDC against LC-MSMS, which were comparable to that methodology with levels higher than 0.5 ng/ml. PCOS may have increased risk factors for cardiovascular disease and diabetes II. These factors are not properly categorized according to the different phenotypes of PCOS. The main analytes used for this purpose will be evaluated and new ones that contribute elements of greater specificity in this sense

Quantification of Testosterone (T) by 8 Immunoassays and by Liquid Chromatography -Tandem Mass Spectrometry (LC-MSMS) in Normal and Hirsute Women: A Multicenter Study / Cuantificación de testosterona (T) por 8 inmunoensayos y por cromatografía líquida en tandem con espectrometría de masa (LC MS/MS): En mujeres normales e hirsutas. Estudio multicéntrico

Objective: To compare T results in normal and hirsute women, obtained by different laboratories employing the same or different methods, including an in-home RIA, and the gold standard method LC-MS/MS. In addition, T results were referred to a curve obtained by 6 different pools that had been prepared on the basis of LC-MS/MS results. Design: Prospective study Setting: Hormone Determination Laboratory, Hospital Italiano, La Plata, and private practice of each participant laboratory. Patient(s): Blood samples were obtained from 78 individuals sorted into 3 groups, namely, normal men (n:39), normal women (n:24) and hirsute women (n:15) Interventions(s): None Main Outcome Measure(s): To evaluate if the results obtained in each lab for each serum sample by the methods currently employed in our country are significantly different from those obtained by LC-MS/MS (Gold standard) Result(s) One out of the 24 NW showed high T values by LC - MS/MS. In each lab, except in 1 (Architect) T results of this serum sample were normal. Two out of the 15 hirsute patients showed normal T values (LC - MS/MS). Method and number of labs -shown between brackets- and percentages of normal T results (false negatives) are described for each method as follows: Chemiluminescence: Axsym - Abbott (Axn) - (3) 85, Architect - Abbott - (Arch); (2) 70; Immulite - Siemmens - (IMM); (2) 42; Electrochemiluminescence - Elecsys - Roche- ((EQL); (4) 52; Fluorescent enzymatic - Vidas - Bio-Merieux - (Vidas) (1) 69; Manual coated tube radioimmunoassay (RIA): RIA - Siemmens Coat-a-Count (RIA S); (3) 64; RIA - DSL Inc (RIA DSL); (1) 31; RIA - DIASource - (DiaS); (1) 31; and in-Home RIA (in-H) (1) 12. Statistically significant differences were obtained between different methods and against LC MS/MS. In-H method is the one that comes closest to 1 on the Weighted Deming regression and closest to zero on the SD intercept, (standard deviation of the constant in the straight line equation) indicating that the values match those obtained by LC - MS/MS. The values recorded by the various methods employed showed no significant modifications when plotted against a secondary standard curve. Conclusion(s) This indicates that the techniques in current use in our area underestimate hyperandrogenemia in these patients. Discrepancies are not due to the various calibration curves proposed in the corresponding commercial kits. The fact that the In-H technique affords finer results while employing a larger serum volume suggests that the disparities among the various commercial methods result from their limited sensitivity to the sample volumes they process.

El diagnóstico de hiperandrogenemia requiere la demostración de niveles aumentados de Testosterona Total (TT) en suero. Los inmuno ensayos comerciales dan resultados divergentes a niveles bajos de TT como los obtenidos en mujeres. Valoramos los niveles de TT en 24 mujeres normales (MN) y 15 hirsutas (MH) en 18 laboratorios por métodos comúnmente empleados en nuestro medio. Los métodos y número de laboratorio que emplearon cada método se muestra entre paréntesis así como los porcentajes de T normal (falsos negativos) obtenidos en cada método fueron: Quimioluminiscencia: Axsym - Abbott (Axn)- (3) (85), Architect - Abbott - (Arch); (2) 70; Immulite - Siemmens - (IMM); (2) 42; Electroquimioluminiscencia - Elecsys - Roche- ((EQL); (4) 52; Enzimático acoplado a fluorescencia Vidas - Bio-Merieux - (Vidas) (1) 69, Radioinmunoiensayo en tubo recubierto (RIA): RIA - Siemmens (RIA S); (3) 64; RIA - DSL Inc (RIA DSL); (1) 31; RIA - DIASource - (DiaS); (1) 31; y un método desarrollado en uno de los laboratorios (in-H) (1) 12. Comparativamente a LC MS/MS los niveles fueron en todas las muestras significativamente más bajos por Axn y en 18 de las 24 MN por DiaS. En 7 casos; 3 por RIA S, 2 por IMM y 1 por EQL y Arch los valores de TT fueron superiores al límite superior de sus respectivos métodos. En todos los casos se obtuvo una gran variación entre los mismos y con diferentes métodos. Trece de las 15 MH tuvieron niveles altos de TT por LC MS/MS. De las MH con TT aumentada de acuerdo a la determinación por LC MS/MS entre el 12 y el 85 % de las mismas por los distintos métodos fueron normales, indicando que en la mayoría de los métodos habitualmente utilizados en nuestro medio subvaloran la hipernadrogenemia en estas pacientes. Estas diferencias se hacen más notorias a niveles más bajos de TT (Se obtuvieron valores normales en el 71 % de los casos con valores de TT entre 0,47 y 0,74 ng/ml y en el 38 % de los casos, con niveles de TT mayor a 0,98 ng/ml). ...

Quantification of Testosterone (t) by 8 Immunoassays and by Liquid Chromatography -Tandem mass Spectrometry (lc -msms) in Normal and Hirsute Women: A Multicenter Study / Cuantificación de testosterona (t) por 8 inmunoensayos y por cromatografía líquida en tandem con espectrometría de masa (Lc ms/ms): En mujeres normales e hirsutas. Estudio multicéntrico

Objective: To compare T results in normal and hirsute women, obtained by different laboratories employing the same or different methods, including an in-home RIA, and the gold standard method LC-MS/MS. In addition, T results were referred to a curve obtained by 6 different pools that had been prepared on the basis of LC-MS/MS results. Design: Prospective study Setting: Hormone Determination Laboratory, Hospital Italiano, La Plata, and private practice of each participant laboratory. Patient(s): Blood samples were obtained from 78 individuals sorted into 3 groups, namely, normal men (n:39), normal women (n:24) and hirsute women (n:15) Interventions(s): None Main Outcome Measure(s): To evaluate if the results obtained in each lab for each serum sample by the methods currently employed in our country are significantly different from those obtained by LC-MS/MS (Gold standard) Result(s) One out of the 24 NW showed high T values by LC - MS/MS. In each lab, except in 1 (Architect) T results of this serum sample were normal. Two out of the 15 hirsute patients showed normal T values (LC - MS/MS). Method and number of labs -shown between brackets- and percentages of normal T results (false negatives) are described for each method as follows: Chemiluminescence: Axsym - Abbott (Axn) - (3) 85, Architect - Abbott - (Arch); (2) 70; Immulite - Siemmens - (IMM); (2) 42; Electrochemiluminescence - Elecsys - Roche- ((EQL); (4) 52; Fluorescent enzymatic - Vidas - Bio-Merieux - (Vidas) (1) 69; Manual coated tube radioimmunoassay (RIA): RIA - Siemmens Coat-a-Count (RIA S); (3) 64; RIA - DSL Inc (RIA DSL); (1) 31; RIA - DIASource - (DiaS); (1) 31; and in-Home RIA (in-H) (1) 12. Statistically significant differences were obtained between different methods and against LC MS/MS. In-H method is the one that comes closest to 1 on the Weighted Deming regression and closest to zero on the SD intercept, (standard deviation of the constant in the straight line equation) indicating that the values match those obtained by LC - MS/MS. The values recorded by the various methods employed showed no significant modifications when plotted against a secondary standard curve. Conclusion(s) This indicates that the techniques in current use in our area underestimate hyperandrogenemia in these patients. Discrepancies are not due to the various calibration curves proposed in the corresponding commercial kits. The fact that the In-H technique affords finer results while employing a larger serum volume suggests that the disparities among the various commercial methods result from their limited sensitivity to the sample volumes they process. No financial conflicts of interest exist.

El diagnóstico de hiperandrogenemia requiere la demostración de niveles aumentados de Testosterona Total (TT) en suero. Los inmuno ensayos comerciales dan resultados divergentes a niveles bajos de TT como los obtenidos en mujeres. Valoramos los niveles de TT en 24 mujeres normales (MN) y 15 hirsutas (MH) en 18 laboratorios por métodos comúnmente empleados en nuestro medio, Quimioluminiscencia: Axsym - Abbott (Axn)- (3 ), Architect - Abbott - (Arch); (2); Immulite - Siemmens - (IMM); (2); Electroquimioluminiscencia - Elecsys - Roche- ((EQL); (4); Enzimático acoplado a fluorescencia Vidas - Bio-Merieux - (Vidas) (1), Radioinmunoiensayo en tubo recubierto (RIA): RIA - Siemmens (RIA S); (3) 64; RIA - DSL Inc (RIA DSL); (1) 31; RIA - DIASource - (DiaS); (1) 31; y un metodo desarrollado en uno de los laboratorios (in-H) (1).El número entreparéntesis indica elnúmero de laboratorios que emplearon la misma técnica,y comparamos los resultados por LC MS/MS. Comparativamente a LC MS/MS los niveles fueron en todas las muestras significativamente más bajos por AXS y en 18 de las 24 MN por DiaS. En 7 casos; 3 por RIA S, 2 por IMM y 1 por EQL y Arch los valores de TT fueron superiores al límite superior de sus respectivos métodos. En todos los casos se obtuvo una gran variación entre los mismos y con diferentes métodos. Trece de las 15 MH tuvieron niveles altos de TT por LC MS/MS. De las MH con TT aumentada de acuerdo a la determinación por LC MS/MS entre el 12 y el 85 % de las mismas por los distintos métodos fueron normales, indicando que en la mayoría de los métodos habitualmente utilizados en nuestro medio subvaloran la hipernadrogenemia en estas pacientes. Estas diferencias se hacen más notorias a niveles más bajos de TT (Se obtuvieron valores normales en el 71 % de los casos con valores de TT entre 0.47 y 0.74 ng/ml y en el 38 % de los casos, con niveles de TT mayor a 0.98 ng/ml). En 9 muestras se determinó la TT empleando una curva en el rango de 0.21 a 6.44 ng/ml preparada con de una mezcla de 78 sueros cuyos valores fueron obtenidos por LC MS/MS. No se obtuvo una modificación significativa de los valores indicando que la diferencia entre los distintos métodos no es debida a las diferentes curvas de calibración de los kit comerciales. En conclusión ninguno de los métodos mayormente empleados en nuestro medio son aceptables para la evaluación de niveles menores a 1.5 ng/ml.